KV 1509-039 CHIC, Chrysanthemum Haploid Induction through chromosom elimination (BO-68-001-019, BO-50-002-014, BO-26.03-007-004)

In diploïde gewassen leidt dit tot homozygote di(ha)ploïden en in polyploïde gewassen leidt dit tot een vermindering van de heterozygotie. Dit laatste kan zeer nuttig zijn bij het assembleren van genomen na sequencen en om genetische kaarten te maken die helpen bij 'marker-assisted breeding'. Weefselkweektechnieken om haploïden te maken werken slechts bij een beperkt aantal gewassen en cultivars. Wijzigen van de werkzaamheid van het centromeer-specifieke eiwit CENH3 leidt tot een zogenaamde 'haploïd inducer'. Kruisen met zo'n inducer geeft nageslacht met een haploïd chromosoom aantal, afkomstig van de wild-type ouder.

 

Resultaten 2016 en 2017:

CENH3 komt in chrysant voor in twee paralogen. Guides t.b.v. het CRISPR/Cas9 systeem zijn ontworpen tegen CENH3B. Alle benodigde componenten, zoals promotoren, Cas9 gen, guides, reporter gen, selectiegen en ‘tail-swap’ versies van CENH3 zijn voorhanden en worden via het Golden Gate systeem gecombineerd. Regeneratievermogen is bekeken in 11 chrysant lijnen net als genoverdracht-efficiëntie en stabiele transformatie. Transgene planten zijn verkregen in 3 lijnen. Focus ligt op cultivar ‘1581’, want deze is makkelijk transformeer-/regenereerbaar, maar hexaploïd en op diploïd genotype CHIC-1, want deze heeft maar één CENH3 vorm, namelijk CENH3B.